Agosto de 2021
BNT162b2 es una vacuna desarrollada para prevenir la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19). BNT162b2 es un ARN mensajero (ARNm) modificado con nucleósidos formulado con nanopartículas lipídicas que codifica la proteína espiga del coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2) bloqueada en su conformación de prefusión. https://t.me/QAnons_Espana
Se realizó un estudio de toxicidad para el desarrollo y la reproducción en ratas de acuerdo con las pautas regulatorias internacionales. La dosis completa de BNT162b2 humana de 30 μg de ARNm/dosis (>300 veces la dosis humana en mg/kg) se administró por vía intramuscular a 44 ratas hembra 21 y 14 días antes del apareamiento y en los días 9 y 20 de gestación.
Las ratas fueron sometidas a cesárea y examen fetal completo al final de la gestación, ya la otra mitad se les permitió dar a luz y fueron monitoreadas hasta el final de la lactancia.
Se confirmó una sólida respuesta de anticuerpos neutralizantes antes del apareamiento y al final de la gestación y la lactancia. También se confirmó la presencia de anticuerpos neutralizantes en fetos y crías. Los efectos no adversos, relacionados con la reacción local en el lugar de la inyección, se observaron en las madres como se esperaba de otros estudios con animales y de acuerdo con las observaciones en humanos.
No hubo efectos de BNT162b2 en el rendimiento de apareamiento femenino, la fertilidad o cualquier parámetro ovárico o uterino ni en la supervivencia embriofetal o posnatal, el crecimiento, el desarrollo físico o el desarrollo neurofuncional en la descendencia hasta el final de la lactancia. Junto con el perfil de seguridad en personas no embarazadas, estos datos de seguridad no clínicos compatibles con ICH respaldan el estudio de BNT162b2 en mujeres en edad fértil y mujeres embarazadas y lactantes.
1 . Introducción
La enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) ha afectado a decenas de millones de personas en todo el mundo desde que la Organización Mundial de la Salud (OMS) la declaró pandemia el 11 de marzo de 2020 [ 1 ]. Los adultos mayores, las personas con ciertas condiciones coexistentes y los trabajadores de primera línea corren el mayor riesgo de contraer COVID-19 y sus complicaciones y, como tal, los Centros para el Control de Enfermedades recomendaron priorizar la vacunación de estas poblaciones. Datos recientes han demostrado que otras poblaciones, incluidas las mujeres embarazadas, también pueden tener un mayor riesgo [ 2 ,3 ]; sin embargo, las mujeres embarazadas fueron excluidas de los ensayos clínicos iniciales [ 4 , 5 ] hasta que se demostraron suficientes datos de seguridad en adultos no embarazadas. https://t.me/QAnons_Espana
Debido a los cambios en la inmunidad adaptativa y la fisiología asociada con el embarazo, existe una base teórica para sugerir que las mujeres embarazadas pueden tener un mayor riesgo de COVID-19 grave [ [6] , [7] , [8] , [9] ] . Si bien aún no son concluyentes, los estudios han demostrado que el embarazo está asociado con un mayor riesgo de enfermedad grave entre las mujeres que presentan síntomas de COVID-19 en comparación con sus contrapartes no embarazadas [ 10 , 11 ], y tasas de mortalidad en mujeres embarazadas con síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS-CoV-2) se ha informado que las infecciones son casi 14 veces más altas que las de personas de edad similar [ 12]. Estos informes son consistentes con las observaciones de otras enfermedades virales respiratorias, como la influenza pandémica H1N1v, para la cual las muertes asociadas fueron > 5 veces mayores entre las mujeres embarazadas que entre las personas no embarazadas [ 13 ]. Además, los datos disponibles hasta la fecha sugieren que las mujeres embarazadas con COVID-19 también tienen un riesgo potencial de resultados adversos del embarazo, como parto prematuro [ 12 , 14 , 15 ].
Con el desarrollo de vacunas contra la COVID-19, existe la posibilidad de aliviar el mayor riesgo relacionado con la COVID-19 durante el embarazo. La primera vacuna autorizada para uso de emergencia en los Estados Unidos y aprobación condicional en Europa, BNT162b2, una nanopartícula lipídica (LNP) formulada con ARN mensajero modificado con nucleósidos (ARNm) que codifica la proteína de pico SARS-CoV-2, desarrollada por Pfizer-BioNTech, ha demostrado una eficacia del 95 % en un ensayo clínico fundamental y una eficacia ≥90 % en estudios de uso en el mundo real para prevenir la COVID-19 en adultos de 16 años o más [ [16] , [17] , [18] ]. Los datos demuestran la transferencia materna de anticuerpos neutralizantes a los recién nacidos(medido en la sangre del cordón umbilical), que también podría proteger a los bebés [ 19 ]. Se han desarrollado y autorizado otras vacunas contra el COVID-19 en los Estados Unidos, Europa y otros países. Los datos disponibles en mujeres embarazadas indican que las vacunas han sido bien toleradas y que la inmunidad (anticuerpos) puede transferirse a los lactantes [ [19] , [20], [21] ]. En el momento en que se envió este manuscrito, la seguridad y la eficacia en el embarazo no han sido demostradas en ensayos clínicos con ninguna de estas vacunas; sin embargo, está en curso un ensayo clínico de BNT162b2 en mujeres embarazadas (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04754594). https://t.me/QAnons_Espana
Antes de realizar ensayos clínicos en humanos, la seguridad de los medicamentos y las vacunas debe evaluarse en estudios de seguridad no clínicos diseñados para respaldar los requisitos específicos del diseño del ensayo clínico , incluidos la edad, el sexo y el estado reproductivo de los participantes, la duración del tratamiento, e indicación de tratamiento. Los estudios de toxicología general en ratas adultas jóvenes mostraron que BNT162b2 se toleró bien, provocó una respuesta inmunitaria y provocó los cambios inflamatorios esperados. Las pautas del Consejo Internacional para la Armonización (ICH) y la OMS describen las expectativas para el estudio no clínico que es necesario antes de realizar un ensayo clínico de una vacuna en mujeres embarazadas [ 22 , 23]. Este artículo informa sobre el diseño y los resultados del estudio no clínico de toxicidad para el desarrollo y la reproducción (DART) para respaldar el inicio de un ensayo clínico en mujeres embarazadas con BNT162b2.
2 . materiales y métodos
Todos los procedimientos experimentales y de cuidado de animales se llevaron a cabo de conformidad con las pautas para el cuidado y uso de animales de laboratorio [ [24] , [25] , [26] ] y fueron aprobados por el comité ético de Charles River Laboratories France Safety Assessment SAS. La instalación donde se realizó este estudio está acreditada por la Asociación para la Evaluación y Acreditación de Laboratorio Animal Care International.
2.1 . Vacuna
BNT162b2 es una vacuna de ARNm modificada con nucleósidos formulada con LNP que codifica una proteína de pico de longitud completa del SARS-CoV-2 estabilizada por prefusión y anclada a la membrana. Los componentes lipídicos incluyen un lípido ionizable, colesterol, un lípido conjugado con polietilenglicol y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC). BNT162b2 fue fabricado y suministrado por Polymun Scientific, Klosterneuburg, Austria. El control de solución salina consistió en solución salina estéril al 0,9 % para inyección, USP (Lavoisier, Francia).
2.2 . Diseño del estudio
El estudio fue realizado por Charles River Laboratories France Safety Assessment SAS. En la figura 1 se presenta una descripción general del diseño del estudio . Ratas Wistar Han hembras vírgenesCRL:WI(Han) (Charles River Laboratories France; aproximadamente 11 semanas de edad y 179–265 g al inicio de la dosificación) fueron aclimatados, asignados aleatoriamente a grupos en dos cohortes principales (n = 22 por grupo de dosis en la cohorte de cesárea y n = 22 por grupo de dosis en la cohorte de entrega). A las ratas hembra se les administró solución salina o BNT162b2 (30 μg de ARNm/dosis) por vía intramuscular (IM; 0,06 ml/dosis) 21 y 14 días antes del inicio del apareamiento y en los días de gestación (GD) 9 y 20, para un total de 4 dosis . La dosis de 30 μg de ARNm/dosis es la dosis humana completa, pero representa más de 300 veces la dosis humana en mg/kg (basado en 220 g de rata y 70 kg de ser humano). https://t.me/QAnons_Espana
Se alojaron en grupo ratas Wistar Han CRL:WI(Han) (hasta 5 por jaula) hasta emparejarlas para el apareamiento, en cuyo momento las hembras se alojaron 1:1 con un macho reproductor no tratado. Tras la evidencia de apareamiento, las hembras fueron alojadas individualmente durante la gestación y la lactancia. A las ratas se les suministró dieta completa para roedores (Safe, Francia) disponible ad libitum. El agua de origen local (ablandada y filtrada) estaba disponible ad libitum. Las condiciones ambientales en todos los estudios se establecieron para mantener una humedad relativa ≥35 % y una temperatura de 66 °F a 77 °F con la iluminación de la habitación configurada para proporcionar un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas.
2.3 . Observaciones y medidas
Durante todo el estudio se controlaron los signos clínicos, el peso corporal y el consumo de alimentos. Se recolectaron frotis vaginales diariamente y se usaron para determinar la etapa del ciclo desde 14 días antes de la administración de la dosis inicial y continuaron hasta que se observó evidencia positiva de apareamiento (esperma presente en un frotis de contenido vaginal o presencia de tapón copulador). El día en el que se observó evidencia de apareamiento se designó como GD 0.
Las ratas de la cohorte de cesárea se sacrificaron con GD 21 mediante asfixia con CO2 seguida de exanguinación . Se realizó un examen macroscópico de las víscerasabdominales, torácicas y pélvicas . Se extrajo y pesó el útero grávido y se registró el número de cuerpos lúteos en cada ovario y el número, tipo y posición de los sitios de implantación. Los úteros de animales aparentemente no preñados se tiñeron con sulfuro de amonio acuoso al 10 % (v/v) para confirmar la ausencia de sitios de implantación. Los fetos viables se extrajeron del útero y se pesaron individualmente. Los fetos vivos fueron sacrificados mediante la administración oral depentobarbital sódico. (0,05 mL de 182,2 mg/mL; Vetoquinol, Francia) o por decapitación (con fines de extracción de sangre). Se realizó un examen externo detallado de cada feto, incluida la evaluación del cierre del paladar y la determinación del sexo. Los hallazgos externos, viscerales y esqueléticos se registraron como anomalías, variaciones o malformaciones del desarrollo. Aproximadamente la mitad de los fetos fueron examinados en busca de anomalías viscerales utilizando una modificación de la técnica de Staples [ 27 ]. Las cabezas de aproximadamente la mitad de las ratas de cada camada se retiraron y se fijaron en solución de Harrison y posteriormente se examinaron mediante cortes en serie [ 28 ]. Los fetos restantes fueron eviscerados, macerados en hidróxido de potasio y teñidos con rojo de alizarina [29 ] para exámenes esqueléticos. Todas las observaciones morfológicas fetales se registraron en general de acuerdo con la terminología estandarizada [ 30 ]. Tal como lo definió el Centro de pruebas, las observaciones fetales se clasificaron como malformaciones (defectos estructurales que son raros en la población de control y se cree que ponen en peligro la vida o tienen consecuencias fisiológicas importantes), anomalías (anomalías o defectos menores que son relativamente raros en el población de control y/o se considera que no tienen consecuencias fisiológicas importantes), o variaciones (anomalías menores, defectos o formas alternativas que son comunes en la población de control o no tienen consecuencias fisiológicas conocidas). https://t.me/QAnons_Espana
En las cohortes de camadas, se evaluaron las madres en cuanto a los parámetros de parto natural, incluida la duración de la gestación, el tamaño de la camada , el comportamiento materno (p. ej., lactancia, anidación) y la viabilidad de las crías al nacer. Las camadas se redujeron a 8 crías por camada cuando fue posible en el día postnatal (DPN) 4 mediante inyección intraperitonealde pentobarbital sódico (0,1 mL de 182,2 mg/mL; Vetoquinol, Francia). Las crías de rata que no se seleccionaron para observación continua se sometieron a necropsia y examen macroscópico de las vísceras abdominales, torácicas y pélvicas. Se evaluaron las anomalías externas de las crías y se controlaron los pesos corporales y la obtención de la edad de los puntos de referencia del desarrollo físico (despliegue del pabellón auricular y apertura de los ojos). El desplegamiento del pabellón auricular y la apertura de los ojos se evaluaron una vez al día desde el DPN 1 y el DPN 12, respectivamente, hasta que se desplegaron ambos pabellón auricular y ambos ojos estaban abiertos. El desarrollo neurofuncional se evaluó mediante el registro de los reflejos auditivos y pupilares en el PND 21 en respuesta a un sonido de clic y una fuente de luz, respectivamente. Las presas fueron sacrificadas en LD 21 a través de CO 2asfixia seguida de desangrado, y se examinaron los ovarios y el útero, así como las cavidades abdominal y torácica, en busca de lesiones graves. También se registró el número de sitios de implantación en el útero. Las crías se sacrificaron mediante asfixia con CO2 el DPN 21. Después de la eutanasia, se extrajo sangre de al menos 1 cachorro/sexo/camada como se describe a continuación, y se realizó un examen macroscópico de las vísceras abdominales, torácicas y pélvicas.
2.4 . Análisis de anticuerpos
Se recolectó sangre de las madres antes del inicio del estudio, antes del apareamiento el día de la cohabitación, el GD 21 (cohorte de cesárea) y el Día de Lactación (LD) 21 (cohorte de cría). Se recogieron muestras de sangre fetal de rata en GD 21 de fetos seleccionados arbitrariamente por decapitación, y las muestras de sangre se agruparon por camada (mínimo de 1 macho y 1 hembra). Además, se recolectaron muestras de sangre el DPN 21 de al menos 2 cachorros por camada (1 macho y 1 hembra cuando fue posible) mediante punción intracardíaca después de la eutanasia y se agruparon por camada.
Las muestras se recolectaron en tubos sin anticoagulantey se centrifugaron a 1800 g y 4 °C, durante 10 min. El suero resultante se eliminó y las muestras de suero se congelaron a -80 °C antes del análisis de anticuerpos funcionales. Cada muestra de suero fue analizada por duplicado para la detección serológica de anticuerpos neutralizantes específicos del SARS-CoV-2 por VisMederi (Siena, Italia). El ensayo basado en el efecto citopático de microneutralización (CPE) del SARS-CoV-2 es un ensayo manual de 96 pocillos de 4 a 5 días. El día 0, se sembraron células Vero E6 (CRL-1586, American Type Culture Collection) en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos. El día 1, se incubaron diluciones en serie de sueros de prueba con el virus infeccioso SARS-CoV-2 2019 nCOV ITALY/INMI1para permitir que cualquier anticuerpo específico de antígeno se una al virus. A continuación, la mezcla de virus y suero se transfirió a la monocapa de células Vero y se dejó incubar durante 3 o 4 días para permitir que se produjera la infección por el virus no neutralizado. Las placas se visualizaron bajo un microscopio de luz invertida y se determinó el título de microneutralización (MNt) de la muestra. El MNt se definió como el recíproco de la dilución de suero más alta que protege al menos el 50 % de las células del CPE.
2.5 . Estadísticas y análisis de datos
Los datos continuos (p. ej., pesos corporales, cambios en el peso corporal, consumo de alimentos y promedios de camada para el porcentaje de embarazados no viables) se analizaron mediante la prueba de Levene para evaluar la homogeneidad de las varianzas de grupo. Los grupos se compararon utilizando la prueba de Dunnett si la prueba de Levene no era significativa o la prueba de Dunn si lo era. Los datos del intervalo precoital, el ciclo estral y la prueba funcional de la descendencia F1 se analizaron utilizando la prueba de Levene para probar la igualdad de varianza entre los grupos y la prueba de Shapiro-Wilk para evaluar la normalidad de la distribución de datos en cada grupo. Datos con varianzas homogéneas y distribución normalen todos los grupos se analizaron mediante ANOVA seguido de la prueba de Dunnett. Los datos que muestran varianzas no homogéneas o una distribución no normal en al menos 1 grupo se analizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis seguida de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon. El porcentaje de camada de fetos con anomalías se evaluó como datos no paramétricos utilizando la prueba de Dunn. Los datos de incidencia (desarrollo físico y reflejo, rendimiento de apareamiento, índices de fertilidad e índices parentales) se evaluaron utilizando la prueba exacta de Fisher para realizar comparaciones de grupos por pares de interés. https://t.me/QAnons_Espana
3 . Resultados
3.1 . Respuesta de anticuerpos neutralizantes de virus
La administración de BNT162b2 provocó respuestas de anticuerpos neutralizantes contra el SARS-CoV-2 en todas las madres y todas las crías ( Fig. 2 ). Los títulos de anticuerpos neutralizantes contra el SARS-CoV2 medidos como MNt se detectaron en todas las madres aproximadamente 14 días después de la administración de la segunda dosis justo antes de la cohabitación, y los títulos permanecieron elevados en GD 21 y LD 21. Al igual que en las madres, el anticuerpo neutralizante del SARS-CoV2 se observaron títulos en todas las crías (fetos en GD 21 y crías en PND 21).
3.2 . Evaluación de la fertilidad femenina y el embarazo
No hubo efectos relacionados con BNT162b2 sobre la fertilidad femenina, como lo demuestra la falta de efectos sobre la ciclicidad del estro , el intervalo precoital y los índices de apareamiento, fertilidad o embarazo ( Tabla 1 ). En el grupo BNT162b2, todos estos criterios de valoración del rendimiento de apareamiento y la fertilidad fueron comparables con el control concurrente.
Todas las hembras F0 en los subgrupos de cesárea y camada sobrevivieron a la eutanasia programada en GD 21 y LD 21, respectivamente. El único signo clínico asociado con la administración de BNT162b2 fue una hinchazón transitoria en el lugar de la inyección después de la administración de cada dosis durante los períodos de prematrimonio y gestación. La hinchazón se asoció con cojera y/o piloerección en algunos animales durante 1 o 2 días después de la segunda dosis únicamente. Estos signos clínicos no se consideraron adversos porque la salud general de los animales no se vio afectada por estos signos clínicos transitorios. En la necropsia materna tanto en GD 21 como en LD 21, se observaron hallazgos macroscópicos localizados en el lugar de la inyección (área firme, agrandada, área edematosa y/o pálida), que son consistentes con la administración de una vacuna y una respuesta inflamatoria/inmune.
Los únicos otros efectos maternos que se relacionaron con la administración de BNT162b2 fueron las disminuciones leves y transitorias en el peso corporal ( Fig. 3 ) y el consumo de alimentos (datos no mostrados) que siguieron a la administración de cada dosis. La ligera pérdida de peso corporal o la reducción del aumento de peso corporal observada después de la administración de cada dosis se correspondía con la reducción del consumo medio de alimentos que se observó después de las primeras 3 administraciones de dosis. Se observó una recuperación completa de los efectos del peso corporal y el consumo de alimentos entre cada una de las administraciones de dosis, de modo que el peso corporal medio absoluto y el consumo medio de alimentos fueron comparables con el grupo de control dentro de una semana o dos después de cada administración de dosis. https://t.me/QAnons_Espana
3.3 . Evaluación de la cesárea
No hubo efectos relacionados con BNT162b2 en ningún parámetro ovárico o uterino evaluado en la cesárea GD 21 ( Tabla 2). El número de cuerpos lúteos y sitios de implantación en los grupos de control y BNT162b2 fue ligeramente mayor que el rango normal del control histórico (HC). La supervivencia embrionaria temprana no se vio afectada por la administración de BNT162b2. Aunque el porcentaje medio de pérdida previa a la implantación (diferencia entre el número de cuerpos lúteos [CL] y los sitios de implantación divididos por CL) fue estadísticamente (p < 0,05) mayor en el grupo BNT162b2 (9,77 % en comparación con 4,09 % en el grupo de control), el valor estuvo dentro del rango de datos de control histórico (1,4–16,2 %) y probablemente se deba al número numéricamente más alto de CL en el grupo BNT162b2 (14,7 y 15,5 CL en los grupos de control y BNT162b2, respectivamente). Sin embargo, como no hubo diferencias en el número de sitios de implantación (14,1 y 14,0 sitios de implantación/mujer en los grupos control y BNT162b2, respectivamente), fetos vivos (13,2 y 13,1 fetos vivos/madre en los grupos de control y BNT162b2, respectivamente) o crías vivas en la cohorte de parto (13,0 en los grupos de control y BNT162b2), se consideró que la pérdida preimplantación más alta representaba normal variación biológica. BNT162b2 tampoco tuvo impacto en la supervivencia embriofetal posterior a la implantación. El porcentaje medio de pérdida post-implantación y el promedio de vidael tamaño de la camada fue comparable en los grupos de control y BNT162b2 y consistente con los datos de control históricos. No hubo efectos sobre los pesos corporales fetales medios.
3.4 . Exámenes fetales
En la cesárea GD 21, se evaluaron los efectos potenciales de BNT162b2 en los fetos sobre el desarrollo morfológico fetal. No hubo efectos relacionados con BNT162b2 en la morfología fetal externa, visceral o esquelética ( Tabla 3 ). Se observaron dos fetos en el grupo BNT162b2 con observaciones externas (1 feto con gastrosquisis y 1 feto con boca pequeña y agnatia). El feto con agnatia y boca pequeña tenía malformaciones esqueléticas asociadasde mandíbulas cortas y fusionadas. Estas malformaciones externas son hallazgos de fondo normales en esta cepa (están dentro de la incidencia de HC) y solo ocurrieron en fetos únicos y, por lo tanto, no se consideró que estuvieran relacionados con BNT162b2. La malformación visceral del arco aórtico del lado derecho se observó en 1 feto en el BNT162b2 y no en los fetos de control. Este hallazgo no se ha observado en los datos de HC del centro de pruebas con ratas Wistar; sin embargo, se ha informado en el HC de CRL Den Bosch en la misma cepa y fuente (2 fetos en 2 camadas, con una incidencia máxima de 0,8 % fetos/camada), y por lo tanto, este único hallazgo no se consideró relacionado con la administración de BNT162b2 . Todos los demás hallazgos observados en el examen visceral y esquelético fetal ocurrieron con una incidencia dentro de la incidencia de fondo normal observada para esta cepa de rata en el laboratorio realizador y, por lo tanto, se consideraron incidentales. https://t.me/QAnons_Espana
3.5 . Valoración del Parto, Lactancia y Descendencia
BNT162b2 no tuvo efectos sobre el parto o la duración de la gestación ( Tabla 4). El número de cachorros entregados por camada, el número medio de cachorros vivos al nacer y el índice de nacidos vivos en el grupo BNT162b2 fueron comparables al control. La supervivencia hasta el PND 21 tampoco se vio afectada por BNT162b2, como lo demuestra la falta de diferencia en el índice de viabilidad (porcentaje de crías que sobreviven desde el PND 0 hasta el PND 4; antes del sacrificio) y el índice de destete (porcentaje de crías que sobreviven desde el PND 4 hasta el PND 4). PND 21; post-sacrificio) en comparación con el control. La administración de BNT162b2 no tuvo efectos sobre el crecimiento de la descendencia, el desarrollo físico o el desarrollo neurofuncional. No hubo signos clínicos relacionados con la administración de BNT162b2 ni efectos sobre el peso corporal de las crías durante el período previo al destete. No hubo efectos sobre el desarrollo físico o funcional previo al destete de los cachorros F1 ( Tabla 5). En el grupo BNT162b2, la edad a la que se alcanzó el despliegue del pabellón auricular y la apertura de los ojos fue comparable a la del grupo de control. De manera similar, todos los cachorros en los grupos de control y BNT162b2 exhibieron reflejos auditivos y pupilares cuando se evaluaron el DPN 21. En la necropsia programada el DPN 21, no hubo observaciones macroscópicas relacionadas con BNT162b2 en los cachorros (datos no mostrados). https://t.me/QAnons_Espana
FUENTE 👉 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0890623821000800
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